實時熒光定量PCR檢測

聚合酶鏈式反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction,PCR)自誕生之日起就決定了它不僅是一種高敏感、高特異的檢測核酸分子的定性方法，而且也是一個能對核酸分子進行精確定量的有力工具。1996年，美國Applied Biosystems公司推出了一種新定量試驗技術(shù)間實時熒光定量PCR它是通過熒光染料或熒光標記的特異性探針對PCR產(chǎn)物進行標記跟蹤；實時在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度。

實時熒光定量PCR服務(wù)內(nèi)容：
PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時，探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上；PCR擴增時，Taq酶的5'端一3'端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。

實時熒光定量PCR樣品準備條件:
細胞樣品：收集細胞后放入液氮中速凍保存或速東24h后轉(zhuǎn)入-80°C冰箱保存；收集細胞后，視細胞量，直接加入1-1.5mL Trizol溶解裂解細胞，再轉(zhuǎn)入-80°C冰箱保存。
組織樣品：動物組織一般取材后立即放入液氮中速凍保存，液氮凍存24h后可轉(zhuǎn)入-80°C冰箱保存；組織樣品同樣可以采用Trizol溶解裂解后放入-80°C冰箱保存。特殊組織(植物等)建議采用新鮮組織即刻提取RNA,逆轉(zhuǎn)合成cDNA后-20°C保存?zhèn)溆?。所有樣品的處理和保存過程中，切總反復凍融。

樣品運輸條件：樣品運輸條件根據(jù)實驗樣品的處理條件，可以選擇液氮或者干冰運輸。